Полученные культуры поддерживают длительное время и в случае необходимости наращивают в нужных объемах. Для поддержания культур регулярно, не реже одного раза в 7 сут, маточную культуру, находящуюся на стадии экспоненциального роста, пересевают на свежеприготовленную питательную среду. Процедура приготовления и состав сред изложены в разделе 6. Плотность маточной культуры на стадии экспоненциального роста должна составлять не менее 1×104 клеток/мл.

Для проведения работ по пересеву культур предварительно подготавливают рабочее место и посуду в соответствии с рекомендациями, данными в разделе 5. Все процедуры должны исключать попадание токсичных, органических и каких-либо других веществ из окружающей среды в культуральный материал и питательные среды. Важная часть процесса дезинфекции состоит в асептической обработке рук и рабочих поверхностей (лабораторные столы и ламинарные боксы) 70% раствором этанола. Пересев проводится над пламенем спиртовки, в ламинарном боксе, в котором до начала работ по пересеву включают бактерицидную лампу на 30 мин.

Маточную культуру объемом 1 мл стерильными пипетками вносят в емкости для культивирования. Это могут быть пластиковые емкости или стеклянные пробирки объемом 50 мл или колбы Эрленмейера объемом 100 мл, содержащие 50 мл свежеприготовленной питательной среды.

Плотность культуры клеток после пересева должна составлять не менее 200 клеток/мл.

Емкости, содержащие культуры клеток, инкубируют в климатостатах (рисунок), которые поддерживают заданную температуру (10°С, 15°С или 22°С) при освещенности 3500 лк и свето-темновом периоде 12 ч свет/12 ч темнота.

Fig. 11a

 

Рисунок. Климатостат c культурами микроводорослей.

 

Некоторые культуры, поддержание которых не требует специального температурного режима, содержат в шкафах для хранения культур, оборудованных стеклянными дверцами и полками. В помещении, где хранится коллекция таких культур, поддерживается температура 20–22°С, освещенность 3500 лк и режим освещения 12 ч свет/12 ч темнота.

Ежедневно проводится мониторинг культур: их состояние оценивается визуально и/или с помощью стереоскопического микроскопа. Результаты наблюдений регистрируются в рабочем журнале и в паспорте клона (Приложение 3).

Ежедневно в одно и то же время, после окончания темнового периода, суспензию водорослей вручную медленно перемешивают. Эта процедура выполняется для того, чтобы улучшить газообмен и выровнять значения рН за счет выделяющегося углекислого газа в колбах с культурами.

Наверх